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色譜柱的種類

一.高效反相液相色譜柱

以C18為代表的高效反相液相色譜柱一直是以藥物發(fā)現(xiàn)、開發(fā)、方法驗證(validation)為主，高效反相液相色譜柱也具有廣泛的應(yīng)用在藥物代謝及動力學、生命科學、醫(yī)療健康、生物分析檢測、毒品和興奮劑檢測、食品安全分析、環(huán)境分析等領(lǐng)域。高效反相液相色譜制備柱也是重要的分離純化技術(shù)之一。

無論過去，現(xiàn)在還是未來，以球形B型硅膠(5um或3um)為材料骨架的高效反相液相色譜柱在實際應(yīng)用中永遠占有統(tǒng)治地位。常規(guī)HPLC方法的開發(fā)幾乎總是從C18作為出發(fā)點，反相色譜占了80%以上的應(yīng)用。

二.高效正相液相色譜柱

正相液相色譜是較早的色譜模式。直到現(xiàn)在，合成后通過硅膠柱做進一步純化仍然是有機化學家日常工作的一個重要組成部分。在理論上，幾乎所有的溶干正己烷，乙酸乙酯或異丙醇的有機化合物都可以用高效正相液相色譜分析。但在實際應(yīng)用中，高效正相液相色譜的應(yīng)用比高效反相色譜少得多。這是因為正己烷，乙酸乙酯沒有像水，甲醇或乙腈那樣受歡迎。此外，A型硅膠正相液相色譜給客戶一個慣性思維:高效正相液相色譜的平衡時間很長。

事實上，高效正相液相色譜在制備規(guī)模的色譜純化中一直發(fā)揮了重要作用。這是因為

(1)高效正相液相色譜比高效反相色譜柱壓低得多。

(2)高效正相液相色譜用的溶劑例如正己烷，乙酸乙酯很容易通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去。

(3)吡咯等蒸發(fā)性溶劑徹底改善了堿性有機化合物在B型球形硅膠，Diol和PEG正相液相色譜柱上的峰形。

此外，不管制備規(guī)?；蚍治鰷y試

(1)結(jié)構(gòu)異構(gòu)體分離分析必須使用正相液相色譜或超臨界流體色譜。

(2)環(huán)境中腐殖酸的結(jié)構(gòu)鑒定必須使用甲基化或硅烷化消除小分子聚集，然后使用正相液相色譜或超臨界流體色譜。這種小分子聚集的自然現(xiàn)象一定相當廣泛。

PEG正相液相色譜鍵合相等將讓客戶重新評估高效正相液相色譜的價值。

三.高效親水液相色譜柱

高效親水液相色譜是一個介于正相和反相高效液相色譜之間的運作模式。這個模式來自NH2色譜柱的糖分析應(yīng)用。在此之后，逐步在Diol，硅膠和親水性高分子鍵合相找到了一些有價值的應(yīng)用。

近年來，高效親水液相色譜成為比較流行的色譜的運作模式，主要是因為親水性化合物有良好的保留和高效親水液相色譜在LC-MS/MS中的應(yīng)用。

四.高效強陽離子交換液相色譜柱

離子交換液相色譜是生物分離較為常見且有用的一種色譜模式。 另一方面，小分子分離分析極少使用高效離子交換液相色譜。這是因為:

(1)新穎的反相和多功能鍵合相和TX連續(xù)出現(xiàn)，在很大的程度上補償了常規(guī)C18鍵合相的缺點。C18、C8鍵合相也有重大進展。高效親水液相色譜柱也覆蓋了許多分析應(yīng)用。

(3)相比之下，硅膠基質(zhì)的高效離子鍵合相幾十年產(chǎn)量取得質(zhì)的突破。硅膠基質(zhì)的高效離子交換鍵合相柱壽命普遍短，疏水相互作用明顯。

五.色譜柱的細分種類：

根據(jù)色譜柱的填料不同。目前市面上有以下色譜柱類型:

1.硅膠柱:硅膠是液相色譜法較早普及使用的色譜譜柱填料。其適用范用廣。但是它只能在PH2.0-7.5的條件下使用，且使用溫度一定要小于60度。

2.化學鍵合固相的色譜柱：

2.1.?非極性的鍵合的色譜柱:是應(yīng)用較廣的色譜柱C1到C22。其中C18是常用的非極性反相色譜柱，它的適用范圍廣泛，而且分離效果好。

2.2.?極性鍵合的色譜柱:常用的氨基(NH2)柱、氰基(CN)柱、二醇基(DIOL)、離子柱

2.2.1.?氦基柱的選擇性首先表現(xiàn)為強的氫鍵結(jié)合能力，然后是在酸性介質(zhì)中為弱陰離交換作用，叔胺基和糧分子的羥基有相互作用，用乙腈:水系統(tǒng)可以分離閃單糖、雙糖、多糖等。

2.2.2. 腈基柱的分離特性與硅膠柱相似，但極性相對較弱，優(yōu)點是梯度洗脫或流動相組成改變時平衡快，

2.2.3.?二醇基鍵合柱一般是縮甘油氧丙基硅烷鍵合相的水解產(chǎn)物，對有機酸和某些高聚物有較好的分離效果，也可用于某些蛋白質(zhì)的水系體積排阻色譜。

3.高分子球色譜柱。

4.包覆聚合物的色譜柱。

5.微粒多孔碳填料的色譜柱。